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屋尘螨重组变应原Der p 2的表达、纯化及免疫学活性鉴定
作者: 刘晓宇, 吉坤美, 高波, 刘志刚 主题: 屋尘螨, 重组变应原Derp2, 蛋白表达, 亲和层析, 免疫印记 年份: 2009
摘要: 目的大量诱导表达含pet24a-derp2质粒的bl21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,经包涵体洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用梯度复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经western blot方法分析derp2重组蛋白的免疫学特性。纯化后的融合蛋白derp2具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子。
屋尘螨变应原Der p 1基因原核表达产物的纯化及特性鉴定
作者: 刘志刚, 杨慧, 付颖媛, 高波, 朱健琦, 吉坤美 主题: 屋尘螨, 变应原, Derp1, 融合蛋白, 复性, 纯化 年份: 2006
摘要: 目的建立屋尘螨主要变应原derp1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性。方法大量诱导表达含pet24a-derp1质粒的bl21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经dot-elisa方法分析derp1纯化蛋白的抗原活性。结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原derp1蛋白。dot-elisa法检测结果表明经复性并纯化的derp1蛋白呈强阳性反应,最佳血清稀释度为1∶64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应。结论纯化后的融合蛋白derp1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子。
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