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花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定
作者: 易海涛, 刘志刚, 闫浩, 刘芳, 赵郭存, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Arah2.02, 克隆, 表达, 免疫印迹 年份: 2010
摘要: 通过提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生ara h2.02基因,将反转录的基因连入pmd19-t simple vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中,iptg诱导表达、western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的ige结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.
花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
作者: 易海涛, 刘志刚, 刘芳, 闫浩, 汤慕瑾, 肖小军, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Ara h 8, 克隆表达, 纯化, 免疫印迹 年份: 2011
摘要: 目的:克隆花生主要过敏原ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生ara h 8基因;将反转录的基因连入pmd19-t simple vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中;iptg诱导表达;通过ni2+亲和层析(fplc)纯化目的蛋白ara h 8;western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中ige结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。
花生过敏原Ara h2与Ara h6的生物信息学比较研究
作者: 夏立新, 闫浩, 汤慕瑾, 朱海, 刘志刚 主题: 生物信息学, 免疫, 花生过敏原, 同源建模, Arah2过敏原, Arah6过敏原, 抗原表位, 交叉反应, 低致敏原疫苗 年份: 2010
摘要: 运用生物信息学技术比较ara h2和ara h6从一级结构到三级结构的异同.结果发现,ara h2含有一段独有的序列(60~73),其中包括ara h2三个主要ige抗原表位中的两个.以ara h6为模板进行同源建模获得了ara h2的立体结构,与ara h6的结构叠加拟合后,该结构多出一段由蛋白环连接的反向平行β-折叠(58~72),其伸展结构同样包含上述两个ige表位的蛋白序列.探讨从ara h2和ara h6的一级结构到三级结构产生免疫学活性差异的原因,为研究花生过敏机制及设计低致敏原疫苗奠定基础.
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