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王棕花粉变应原的分析与鉴定
作者: 孟光, 姚敏, 刘志刚, 宋娟娟, 李春林 主题: 王棕花粉, 变应原, SDS-PAGE, Western-blot 年份: 2009
摘要: 目的对我国南方常见的棕榈科植物王棕花粉(roystonea regia pollen)变应原蛋白进行分离、分析与鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供基础。方法取常规方法制备的王棕花粉浸出液,采用sds-page分离王棕花粉蛋白质组分,测定其相对分子量,同时用10例对王棕花粉过敏的患者血清作western-blot鉴定其变应原及主要变应原成分。结果sds-page显示王棕花粉有10条可辨蛋白带,其中主要条带有8条,分别为100000、66000、38000、36000、29000、30000、24000、16000和14000mr,western-blot结果表明,10例王棕花粉过敏患者血清全部呈阳性反应,有66000、24000、16000和14000mr共4条致敏条带,其中分子量在16000和14000mr的蛋白为主要变应原。结论王棕花粉变应原的分析与鉴定为临床王棕花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。
方斑东风螺过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张剑文, 刘志刚 主题: 方斑东风螺, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对方斑东风螺的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离方斑东风螺的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对方斑东风螺主要过敏原进行初步纯化。结果方斑东风螺粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示过敏患者的阳性混合血清能与其中3个蛋白条带起反应,相对分子质量分别是56000、28000和22000。离子交换层析可初步纯化出28000和22000的过敏原蛋白。结论本实验对方斑东风螺过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出方斑东风螺的主要过敏原。
大闸蟹过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 邓利平, 刘志刚 主题: 大闸蟹, 过敏原, SDS-PAGE, Western-Blotting, DE-52离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的:对大闸蟹的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法:过sds-page电泳分离大闸蟹的蛋白质组分,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对大闸蟹主要过敏原进行初步纯化。结果:大闸蟹粗提液sds-page显示,其蟹身、四肢和蟹黄的蛋白条带不同,大闸蟹全身含量高的蛋白有9条,western-blotting显示蟹全身蛋白出现了5条明显的阳性条带,分子量分别为25、23、21、19 ku和11 ku。离子交换层析可初步纯化出11 ku的过敏原蛋白。结论:对大闸蟹过敏原成功进行分离和鉴定,并初步纯化出腰果的主要过敏原。
斑节对虾过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张慧, 刘志刚 主题: 斑节对虾, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对斑节对虾的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离斑节对虾的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对斑节对虾主要过敏原进行初步纯化。结果斑节对虾粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示对斑节对虾过敏患者的阳性混合血清能与7个蛋白条带起反应,相对分子质量分别为71000、43000、34000、23000、21000、20000和19000,离子交换层析可初步纯化出相对分子质量为34000和21000的过敏原蛋白。结论本实验对斑节对虾过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出斑节对虾的主要过敏原。
芝麻过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 陈莉娜, 刘志刚 主题: 芝麻, 过敏原, SDS-PAGE, Western-Blotting, DE-25 年份: 2009
摘要: 通过sds-page电泳分离芝麻的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法其鉴定过敏原,通过离子交换层析对芝麻主要过敏原进行初步纯化。结果表明白芝麻粗提液sds-page显示有14条蛋白条带。黑芝麻粗提掖sds-page显示有16条蛋白条带。western-blotting显示对芝麻过敏患者的混合阳性血清均能与黑芝麻、白芝麻11 ku蛋白反应,离子交换层析可初步纯化出白芝麻11 ku的过敏原蛋白。
BSA-ELISA初步检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE
作者: 姚敏, 孟光, 刘志刚, 孔小丽 主题: 短穗鱼尾葵花粉, SDS-PAGE, Western blotting, ELISA 年份: 2009
摘要: 目的对短穗鱼尾葵花粉粗浸液的主要变应原进行分析、鉴定。方法通过sds-page分析短穗鱼尾葵花粉蛋白质组份,采用western blotting鉴定主要变应原,以短穗鱼尾葵花粉粗浸液包板,摸索出其包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度,采用bsa-elisa法对短穗鱼尾葵花粉过敏患者血清进行初步检测,并与皮肤挑刺试验比较。结果短穗鱼尾葵花粉粗浸液sds-page显示有30余条蛋白条带,其中主要蛋白条带有10条,western blotting显示5例短穗鱼尾葵花粉过敏患者的混合血清能与其中3条蛋白条带起反应,分子量分别是26000、14000和12000mr。bsa-elisa检测短穗鱼尾葵花粉特异性ige,最适粗浸液稀释度为1:100,血清稀释倍数为1:5,生物素化抗体为1:1000,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(strepavidin-hrp)为1:1000。在此条件下bsa-elisa与浸液皮试比较,检出结果与皮试阳性患者血清符合率为90%,与皮试阴性患者符合率为80%,与健康人对照检测符合率为100%。结论本实验对短穗鱼尾葵花粉主要变应原进行了分离和鉴定,bsa-elisa法测定结果与皮肤挑刺试验初步比较符合率较好。
美洲大蠊特异性抗原的蛋白印迹分析
作者: 韩国庆, 刘志刚, 阴伟雄, 胡川, 白羽, 林立丰 主题: 美洲大蠊, 抗原, SDS-PAGE, Western-blotting 年份: 2006
摘要: 目的探讨美洲大蠊不同时期抗原成份分析以及特异性抗原组分鉴定。方法本文通过采用coca's提取液提取得到美洲大蠊粗浸液抗原,通过饱和(nh4)2so4沉淀以及十二烷基磺酸钠聚丙酰胺凝胶电泳(sds-pase),对其抗原成份进行分析,并选用对蟑螂过敏性疾病患者阳性血清进行免疫印迹试验(western-blotting)。结果美洲大蠊成虫、若虫、幼虫、虫卵生活史不同时期及不同部位抗原各有不同数量的蛋白条带,但生活史各阶段均出现6条蛋白主带,分别为:92、78、66、56、52和40kd,免疫印迹显示其92、78、49和26kd为美洲大蠊成虫特异性变应原,其中78kd是主要变应原。结论美洲大蠊78kd蛋白为主要变应原,92、49和26kd为次要变应原,本研究为蟑螂变应原诊断试剂和疫苗的研制奠定了基础。
家蚕30kD特异性变应原的分析、纯化与质谱鉴定
作者: 刘志刚, 张杰, 林格 主题: 家蚕, 过敏原, SDS-PAGE, Western blotting, 离子交换层析, 质谱分析 年份: 2007
摘要: 以coca’s提取液分别提取到不同时期家蚕bombyx mori的粗浸液,利用sds-page和western blotting鉴定其特异性变应原,然后用deae-52离子交换层析及切胶纯化出30kd的特异性变应原,再经maldi-tof在线联机分析,所得质谱数据进入网站搜索分析。结果显示:1~5龄家蚕均有20条左右蛋白带,其中5龄家蚕有23条蛋白带,主带有11条(82、79、60、51、46、38、32、30、28、24和18kd)。选用家蚕过敏患者阳性血清进行免疫印迹,1~4龄家蚕均显示出82和79kd的特异性变应原;但只有5龄家蚕的30kd蛋白为特异性变应原,通过离子交换层析和经切胶纯化出30kd蛋白,再经maldi-tof-ms鉴定该蛋白为外膜蛋白。提示家蚕不同时期抗原成分有所变化,5龄家蚕新出现的30kd蛋白为特异性变应原。
利用胶束电动毛细管电泳比较五种提取鲫鱼总蛋白方法研究
作者: 黎锋, 吴海强, 戈早川, 刘志刚 主题: 提取方法, 食物过敏原, SDS-PAGE, MEKC 年份: 2008
摘要:
牛奶过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 袁小平, 刘志刚, 吉坤美 主题: 牛奶, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2008
摘要: 对牛奶过敏原进行分离、鉴定与纯化。通过sds-page电泳分离牛奶的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对牛奶过敏原进行初步纯化。结果表明,鲜牛奶粗提液sds-page显示蛋白条带有12条,奶粉粗提液sds-page显示出的蛋白条带与鲜牛奶的蛋白条带基本一致。鲜牛奶western-blotting显示14ku的阳性条带。离子交换层析可初步纯化出14ku的过敏原蛋白。本研究对牛奶过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出牛奶的主要过敏原。
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