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大黄鱼过敏原的提取、分离及免疫学特性鉴定
作者: 杨睿, 吴海强, 刘志刚 主题: 大黄鱼(Pseudosciaena crocea), 过敏原, 提取与纯化, 免疫活性, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 目的提取、分离大黄鱼特异性过敏原成分,并对其免疫学特性进行鉴定。方法采用coca’s提取液提取大黄鱼蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析大黄鱼总蛋白的组成,以对鱼过敏患者阳性血清为一抗,western-blotting分析大黄鱼中的过敏原;阴离子交换层析对大黄鱼总蛋白进行初步分离,western-blotting分析各个组份的免疫学活性。结果大黄鱼粗浸液蛋白分子量在8~116kd之间;western-blotting检测到分子量为54、29、27和14kd的过敏原;通过离子交换层析分离,过敏原蛋白的相对含量有显著提高,且大多都保持原有的免疫学活性。结论研究发现了大黄鱼中多种过敏原并对其免疫学活性进行了鉴定。
双抗体夹心ELISA法测定食物中牛奶过敏原蛋白成分
作者: 詹政科, 刘萍, 吉坤美, 李佳娜, 仇什, 刘志刚 主题: ELISA, 多克隆抗体, 牛奶过敏原, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(elisa)测定食物中牛奶过敏原成分。通过提取牛奶过敏原蛋白,免疫小鼠制备抗牛奶过敏原的多抗,免疫印迹法鉴定多抗与牛奶过敏原蛋白的反应,并建立双多抗夹心elisa法。结果表明,该法检测牛奶过敏原蛋白的最低检出限为25μg/l,标准曲线在25~1000μg/l范围内线性良好;同时对市场上食物标签标注含有牛奶、未含牛奶成分以及标注不详共12种食品进行检测,结果10种食品检测结果与食物标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果一个呈现阳性,一个呈现阴性。这说明本方法对于未标注牛奶过敏原成份的食品检测具有一定的实际应用价值。
双抗体夹心ELISA法测定食物中花生过敏原蛋白成分
作者: 吉坤美, 陈家杰, 汤慕瑾, 郑丽, 刘志刚 主题: ELISA, 多克隆抗体, 花生过敏原, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 通过建立双抗体夹心elisa法测定食物中花生过敏原蛋白成分,为进出口食品花生过敏原成分检测和由花生导致的食物过敏性疾病的预防提供技术基础。提取花生总蛋白,免疫小鼠制备抗花生总蛋白的多克隆抗体,用该抗体包被酶标板,并用生物素标记该多抗,从而建立双多抗体夹心elisa法;自制花生总蛋白标准品并检测该方法的灵敏度,同时检测15种食品中是否含有花生蛋白成分。成功地研制出双抗体夹心elisa法检测食品中花生过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为8ng/ml,标准曲线在8ng/ml~125ng/ml范围内线性良好;13种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。
双抗体夹心ELISA法测定食物中大豆过敏原蛋白成分
作者: 陈家杰, 朱海, 叶卫翔, 吉坤美, 刘志刚 主题: ELISA, 多克隆抗体, 大豆过敏原, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 通过建立双抗体夹心elisa法测定食物中大豆过敏原蛋白成分,为进出口食品中大豆过敏原成分检测和食物过敏性疾病的预防提供技术基础。提取大豆总蛋白,免疫小鼠制备抗大豆总蛋白的多克隆抗体,用该抗体做包被抗体,并用生物素标记该多抗作为捕捉抗体,从而建立双多抗体夹心elisa法;检测该方法的灵敏度,同时检测10种食品中是否含有大豆过敏原蛋白成分。sds-page电泳结果显示大豆过敏原总蛋白在120、60、35、30、28、18ku处条带明显;免疫印迹显示,这些条带与制备的高效价抗大豆蛋白的多抗具有明显的阳性反应。检测食品中大豆过敏原蛋白成分双抗体夹心elisa法最低检出限为~100ng/ml,标准曲线在100ng/ml~12.8μg/ml范围内线性良好;10种进口食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符。
胶体金免疫层析法检测食品中花生过敏原蛋白成分
作者: 吉坤美, 陈家杰, 詹群珊, 李佳娜, 刘志刚 主题: 花生过敏原, 胶体金, 免疫层析法, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 建立一种简易快速胶体金免疫层析法(gica)用于检测食品中花生蛋白成分。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记抗花生蛋白成分的抗体,制成免疫层析测试条。食品中花生蛋白成分与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。自制花生抗原标准品并检测该方法的灵敏度,同时检测19种食品中是否含有花生蛋白成分。结果表明:gica测试条与花生蛋白抗原呈特异性反应,检测自制的花生抗原标准品的灵敏度可达50ng/ml,用gica试条检测了19种食品中,其中13种食品标签上标注含有花生过敏原成分的食品检测结果均呈阳性,4种食品标签上标注不含花生过敏原成分的食品检测结果均呈阴性,而2种食品标签上没有标注过敏原成分的食品检测呈阳性。
双歧杆菌对食物过敏治疗作用的实验研究
作者: 李建杰, 刘晓宇, 杨成彬, 陈思, 刘志刚 主题: 双歧杆菌, 食物过敏, 肠组织, 肥大细胞 年份: 2011
摘要: 目的探讨双歧杆菌对食物过敏的治疗作用。方法 4周龄棕色挪威大鼠(brown-norway rat,bn rat)构建卵清蛋白(ovalbumin,ova)致敏动物模型,以ova 1 mg每天连续灌胃6周,同时分别建立pbs对照组和双歧杆菌治疗组;第6周取血测定血清中ova特异性ige(ova-ige)水平和igg(ova-igg)水平作为模型评测指标;采用张力换能器测定肠道收缩情况,苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin stain,he)及甲苯胺蓝(toluidine blue benzen esulfonic acid,tb)染色观察肠组织病理变化和肠粘膜肥大细胞数目和形态变化。结果第6周时实验组ova-ige和ova-igg含量显著升高,与对照组相比,ova-ige存在显著性差异(p<0.05),ova-igg存在极显著差异(p<0.01);经益生菌治疗后,ova-ige和ova-igg含量显著下降,与实验组相比,存在显著性差异(p<0.05)。双歧杆菌治疗组肠组织收缩较ova组显著降低,存在显著性差异(p<0.05);he染色和甲苯胺蓝染色可见双歧杆菌治疗组肠粘膜破坏程度、肠粘膜肥大细胞脱颗粒现象较ova组缓解。结论 ova致敏模型和双歧杆菌治疗组模型成功建立,双歧杆菌对食物过敏有较好的治疗作用。
芒果过敏的研究进展
作者: 吴序栎, 张红云, 刘志刚, 王琳琳, 邓志琼 主题: 芒果, 过敏原, 食物过敏 年份: 2010
摘要: 芒果是世界范围内广泛栽培的热带水果,其所含有的过敏原可能危及人体健康。本文对芒果过敏的临床症状、流行情况、芒果过敏原及芒果过敏原与其他过敏原之间交叉反应的研究进展进行了综述。
时间分辨免疫荧光法测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分
作者: 吉坤美, 李就鸿, 李盟, 吴序栎, 刘志刚 主题: 时间分辨免疫荧光法, 鸡蛋过敏原, 多克隆抗体, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 目的:建立双抗体夹心时间分辨免疫荧光法(trfia)用于测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分,为进出口食品鸡蛋过敏原成分检测提供技术基础。方法:提取鸡蛋过敏原总蛋白,免疫小鼠获得多克隆抗体,并以此抗体包被酶标板,采用生物素标记抗鸡蛋过敏原总蛋白抗体、eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心trfia方法,用于检测10种食品中是否含有鸡蛋蛋白成分。结果:鸡蛋总蛋白sds-page显示带大致有10条,其中主要条带有4条,分子量分别为71、55、38、14kda;成功地研制出双抗体夹心trfia法检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为0·625ng/ml,标准曲线在12·5~640ng/ml范围内线性良好;8种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。结论:初步建立了检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分的双抗体夹心trfia,具有较好的特异性和灵敏度;该方法对于未标注鸡蛋过敏原成分的食品检测具有一定的实际应用价值。
双抗体夹心ELISA法测定食物中虾过敏原成分
作者: 吴序栎, 吉坤美, 李佳娜, 詹政科, 刘志刚 主题: ELISA, 多克隆抗体, 虾过敏原, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 通过建立双抗体夹心elisa法测定食物中虾过敏原成分,为食物过敏的预防与诊断提供理论基础。提取虾中过敏原蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏原的多克隆抗体,并以多克隆抗体包被酶标板,生物素标记多抗,建立双多抗体夹心的elisa法测定食物中虾过敏原成分。成功地研制出双抗体夹心elisa法检测食品中虾过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为40ng/ml,标准曲线在40~1000ng/ml范围内线性良好。初步建立了检测虾过敏原蛋白成分的elisa法,并具有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制虾过敏原成分的elisa检测试剂盒打下了基础。
时间分辨免疫荧光法测定食物中花生过敏原成分
作者: 刘志刚, 李佳娜, 顾耀亮, 夏立新, 陈家杰 主题: 时间分辨荧光免疫法, 花生过敏原, 多克隆抗体, 食物过敏 年份: 2010
摘要: 目的:建立双抗体夹心时间分辨荧光免疫法[time-resolved fluoroimmunoassay(trfia)]测定食物中花生过敏原蛋白成分,为进出口食品中花生过敏原成分检测和由花生导致的食物过敏性疾病的预防提供技术基础。方法:提取花生蛋白,免疫小鼠制备抗花生总蛋白的多克隆抗体,用该抗体包被酶标板,并用生物素标记该多抗作为捕捉抗体,eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心trfia方法,检测该方法的灵敏度,同时用于13种食品中花生过敏原蛋白成分检测。结果:初步地研制出双抗体夹心trfia法检测食品中花生过敏原蛋白成分,具有特异性,和其最低检出限为0.1ng/ml,标准曲线在0.1~160ng/ml范围内线性良好;11种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。
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