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大黄鱼过敏原的提取、分离及免疫学特性鉴定
作者: 杨睿, 吴海强, 刘志刚 主题: 大黄鱼(Pseudosciaena crocea), 过敏原, 提取与纯化, 免疫活性, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 目的提取、分离大黄鱼特异性过敏原成分,并对其免疫学特性进行鉴定。方法采用coca’s提取液提取大黄鱼蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析大黄鱼总蛋白的组成,以对鱼过敏患者阳性血清为一抗,western-blotting分析大黄鱼中的过敏原;阴离子交换层析对大黄鱼总蛋白进行初步分离,western-blotting分析各个组份的免疫学活性。结果大黄鱼粗浸液蛋白分子量在8~116kd之间;western-blotting检测到分子量为54、29、27和14kd的过敏原;通过离子交换层析分离,过敏原蛋白的相对含量有显著提高,且大多都保持原有的免疫学活性。结论研究发现了大黄鱼中多种过敏原并对其免疫学活性进行了鉴定。
花生Ara h6基因的克隆、表达以及免疫活性鉴定
作者: 闫浩, 刘志刚, 李荔, 陈家杰, 刘小平, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Arah6, 基因克隆表达, 免疫活性 年份: 2010
摘要: 目的:克隆花生主要过敏原arah6基因,诱导表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生arah6的基因,将测序正确的片段连入原核表达载体pet-28a上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中,iptg诱导表达,通过ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白,western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明花生arah6目的片段全长为438bp,编码145个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同。该基因诱导表达的产物纯化后经sds-page鉴定为17kda。western-blotting结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中ige结合,具有免疫原性。结论:成功克隆花生过敏原arah6的基因,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。
花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定
作者: 易海涛, 刘志刚, 闫浩, 刘芳, 赵郭存, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Arah2.02, 克隆, 表达, 免疫印迹 年份: 2010
摘要: 通过提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生ara h2.02基因,将反转录的基因连入pmd19-t simple vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中,iptg诱导表达、western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的ige结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.
鸡蛋过敏原分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 杨志华, 刘志刚, 吉坤美 主题: 鸡蛋, 过敏原, 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE), 免疫印迹(Western-blotting), 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对鸡蛋中主要过敏原进行分离、鉴定与纯化。方法分别提取鸡蛋的蛋清与蛋黄的蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离鸡蛋的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting,wb)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对鸡蛋主要过敏原进行初步纯化。结果wb检测显示,蛋黄与鸡蛋过敏患者的阳性混合血清没有反应;蛋清中有4条蛋白带起反应,分子量分别为83,71,38,13 kd,尤以13 kd的蛋白质最为明显,离子交换层析可初步纯化出13 kd的过敏原蛋白。结论鸡蛋的主要过敏原为13 kd的蛋白质,为临床诊断和治疗鸡蛋过敏性疾病提供标准化的过敏原提供了基础依据。
小麦品种“中国春”主要过敏原CM16基因的克隆及序列分析
作者: 邬玉兰, 刘志刚, 余汉谋, 伍文琪 主题: 小麦, 中国春, 过敏原, CM16, 基因克隆 年份: 2009
摘要: 为了给小麦主要过敏原cm16蛋白的重组表达和免疫活性鉴定等研究奠定基础,通过生物信息学方法设计并合成简并性引物,利用rt-pcr技术对小麦主要过敏原cm16基因进行克隆,并进行序列分析。结果表明,克隆获得了小麦主要过敏原cm16基因。基因开放阅读框为432个碱基(包括终止密码子),编码143个氨基酸。该序列编码的蛋白相对分子质量约为15 782,等电点为5.17。序列同源性分析发现其与国外报道的已知小麦cm16基因具有很高的同源性(同源性为99%),因此认为其系小麦过敏原基因,在genbank数据库中的登录号为eu883599。
鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定
作者: 吴序栎, 杨志华, 刘志刚, 吴海强 主题: 鸡蛋, 过敏原, 基因克隆, 表达, Gald3 年份: 2009
摘要: 目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原gal d 3基因并检验其免疫活性。方法:提取鸡蛋的总rna,采用rt- pcr方法扩增出目的基因片段,将其克隆入t载体中进行测序和分析。设计带有酶切位点的特异性引物,采用rt- pcr获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pet-28a中进行诱导表达。通过ni~(2+)亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(western blotting)方法检测其ige结合活性。结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原gal d 3。基因开放阅读框为2118个碱基(包括终止密码子),编码705个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000。表达产物经亲和层析纯化,用western blotting方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性。结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原gal d 3基因,该蛋白具有良好的免疫原性。
大豆主要过敏原Gly m Bd 30K基因的克隆及其原核表达载体的构建
作者: 邬玉兰, 刘志刚 主题: 大豆, 过敏原, Gly m Bd 30K, 克隆, 原核表达载体 年份: 2009
摘要: 利用rt-pcr克隆大豆主要过敏原gly m bd 30k的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增大豆gly m bd 30k的完整开放阅读框,与pet-28a载体连接,构建原核表达载体。结果表明:克隆了大豆主要过敏原gly m bd 30k基因,且构建了其原核表达载体。该基因含有长度为1 140 bp的开放阅读框,编码379个氨基酸。该蛋白质的相对分子质量为42 758,等电点为5.08。序列同源性分析发现其与数据库中已知的gly m bd30k基因同源性很高,因此认为其是大豆的过敏原基因,在genbank数据库中的登录号为eu883600。克隆的大豆主要过敏原gly m bd 30k基因及构建的原核表达载体,为大豆主要过敏原gly m bd 30k的重组表达和免疫活性鉴定等奠定基础。
方斑东风螺过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张剑文, 刘志刚 主题: 方斑东风螺, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对方斑东风螺的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离方斑东风螺的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对方斑东风螺主要过敏原进行初步纯化。结果方斑东风螺粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示过敏患者的阳性混合血清能与其中3个蛋白条带起反应,相对分子质量分别是56000、28000和22000。离子交换层析可初步纯化出28000和22000的过敏原蛋白。结论本实验对方斑东风螺过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出方斑东风螺的主要过敏原。
大闸蟹过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 邓利平, 刘志刚 主题: 大闸蟹, 过敏原, SDS-PAGE, Western-Blotting, DE-52离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的:对大闸蟹的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法:过sds-page电泳分离大闸蟹的蛋白质组分,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对大闸蟹主要过敏原进行初步纯化。结果:大闸蟹粗提液sds-page显示,其蟹身、四肢和蟹黄的蛋白条带不同,大闸蟹全身含量高的蛋白有9条,western-blotting显示蟹全身蛋白出现了5条明显的阳性条带,分子量分别为25、23、21、19 ku和11 ku。离子交换层析可初步纯化出11 ku的过敏原蛋白。结论:对大闸蟹过敏原成功进行分离和鉴定,并初步纯化出腰果的主要过敏原。
斑节对虾过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张慧, 刘志刚 主题: 斑节对虾, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对斑节对虾的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离斑节对虾的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对斑节对虾主要过敏原进行初步纯化。结果斑节对虾粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示对斑节对虾过敏患者的阳性混合血清能与7个蛋白条带起反应,相对分子质量分别为71000、43000、34000、23000、21000、20000和19000,离子交换层析可初步纯化出相对分子质量为34000和21000的过敏原蛋白。结论本实验对斑节对虾过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出斑节对虾的主要过敏原。
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