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椰子花粉过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 孟光, 李春林, 刘志刚, 肖淑英, 姚敏 主题: 椰子花粉, 变应原, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对椰子花粉的变应原组分进行初步的分离、鉴定及纯化。方法提取椰子花粉粗提液,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离椰子花粉的蛋白质组分并测定其相对分子质量,采用免疫印迹法鉴定其变应原成分,并通过离子交换层析对椰子花粉变应原进行初步分离纯化,免疫印迹进行检测。结果sds-page显示椰子花粉粗提液有10条蛋白带,其中相对分子质量(mr)为60 000、50 000、35 000、28 000、19 000、16 000和14 000的蛋白可与椰子花粉过敏性病人血清ige结合,且mr50 000、16 000和14 000为主要变应原;离子交换层析结果显示主要过敏原成分主要分布在ⅴ峰中。结论对椰子花粉变应原进行了初步的分离、鉴定和纯化,为临床椰子花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。
鸡蛋过敏原分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 杨志华, 刘志刚, 吉坤美 主题: 鸡蛋, 过敏原, 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE), 免疫印迹(Western-blotting), 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对鸡蛋中主要过敏原进行分离、鉴定与纯化。方法分别提取鸡蛋的蛋清与蛋黄的蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离鸡蛋的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting,wb)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对鸡蛋主要过敏原进行初步纯化。结果wb检测显示,蛋黄与鸡蛋过敏患者的阳性混合血清没有反应;蛋清中有4条蛋白带起反应,分子量分别为83,71,38,13 kd,尤以13 kd的蛋白质最为明显,离子交换层析可初步纯化出13 kd的过敏原蛋白。结论鸡蛋的主要过敏原为13 kd的蛋白质,为临床诊断和治疗鸡蛋过敏性疾病提供标准化的过敏原提供了基础依据。
方斑东风螺过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张剑文, 刘志刚 主题: 方斑东风螺, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对方斑东风螺的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离方斑东风螺的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对方斑东风螺主要过敏原进行初步纯化。结果方斑东风螺粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示过敏患者的阳性混合血清能与其中3个蛋白条带起反应,相对分子质量分别是56000、28000和22000。离子交换层析可初步纯化出28000和22000的过敏原蛋白。结论本实验对方斑东风螺过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出方斑东风螺的主要过敏原。
斑节对虾过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张慧, 刘志刚 主题: 斑节对虾, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对斑节对虾的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离斑节对虾的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对斑节对虾主要过敏原进行初步纯化。结果斑节对虾粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示对斑节对虾过敏患者的阳性混合血清能与7个蛋白条带起反应,相对分子质量分别为71000、43000、34000、23000、21000、20000和19000,离子交换层析可初步纯化出相对分子质量为34000和21000的过敏原蛋白。结论本实验对斑节对虾过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出斑节对虾的主要过敏原。
家蚕蚕蛹变应原的鉴定、分离与纯化
作者: 张杰, 刘志刚, 林格, 叶湘锋, 刘瑞涛 主题: 家蚕蚕蛹, 过敏原, Western-blotting, 离子交换层析 年份: 2006
摘要: 目的鉴定、分离和纯化大造(dazao)品系家蚕(bombyxmori)的蚕蛹粗提液中的变应原蛋白质组分,为家蚕变应原的蛋白质组学和功能基因组学深入研究奠定基础。方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)和western-blotting,鉴定了家蚕蚕蛹粗浸液中变应原蛋白质分子,并通过阴离子交换和凝胶过滤层析分别对家蚕蚕蛹变应原蛋白质进行初步纯化。结果在家蚕蚕蛹粗浸液中含有表观分子量分别为80000及30000的蚕蛹变应原;从家蚕蛹全虫粗提液中初步分离到分子量为30000的蛹变应原蛋白组分。结论分离得到的家蚕蚕蛹变应原蛋白组分可用于系统研究家蚕过敏原蛋白分子的蛋白质组学和功能基因组学。
刀额新对虾变应原的分离、鉴定与纯化
作者: 喻海琼, 刘志刚, 张帆, 胡川 主题: 刀额新对虾, 变应原, 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺疑胶电泳(SDS-PAGE), 免疫印迹(Western-blotting), 离子交换层析, 疏水层析, 凝胶过滤层析 年份: 2006
摘要: 目的通过对我国常见的刀额新对虾变应原蛋白进行分离、鉴定与纯化,以提供虾特异性变应原用于食物变态反应疾病的诊断和治疗。方法通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离刀额新对虾的蛋白质组分并测定其分子量,收集过敏病人血清,采用免疫印迹(western-blotting)法鉴定其变应原成分,通过离子交换层析对刀额新对虾变应原进行初步纯化,通过疏水层析和凝胶过滤层析进一步对变应原纯化。结果刀额新对虾有17条蛋白带,其中主要条带有10条,68和36 kd为可与虾过敏性病人血清ige结合的特异性变应原;通过各种层析方法纯化出刀额新对虾68 kd变应原,纯度为96%。结论对刀额新对虾变应原进行分离、鉴定和纯化,得到高纯度的68 kd刀额新对虾变应原,为临床虾变态反应疾病的诊断和治疗奠定基础。
家蚕30kD特异性变应原的分析、纯化与质谱鉴定
作者: 刘志刚, 张杰, 林格 主题: 家蚕, 过敏原, SDS-PAGE, Western blotting, 离子交换层析, 质谱分析 年份: 2007
摘要: 以coca’s提取液分别提取到不同时期家蚕bombyx mori的粗浸液,利用sds-page和western blotting鉴定其特异性变应原,然后用deae-52离子交换层析及切胶纯化出30kd的特异性变应原,再经maldi-tof在线联机分析,所得质谱数据进入网站搜索分析。结果显示:1~5龄家蚕均有20条左右蛋白带,其中5龄家蚕有23条蛋白带,主带有11条(82、79、60、51、46、38、32、30、28、24和18kd)。选用家蚕过敏患者阳性血清进行免疫印迹,1~4龄家蚕均显示出82和79kd的特异性变应原;但只有5龄家蚕的30kd蛋白为特异性变应原,通过离子交换层析和经切胶纯化出30kd蛋白,再经maldi-tof-ms鉴定该蛋白为外膜蛋白。提示家蚕不同时期抗原成分有所变化,5龄家蚕新出现的30kd蛋白为特异性变应原。
短穗鱼尾葵及长穗鱼尾葵花粉过敏原的分析、鉴定与纯化
作者: 刘晓宇, 肖淑英, 刘志刚, 姚敏, 孟光 主题: 短穗鱼尾葵花粉, 长穗鱼尾葵, 变应原, 离子交换层析 年份: 2007
摘要: 目的对长穗鱼尾葵和短穗鱼尾葵花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。方法提取这两种花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离粗提液蛋白质组分并测定其分子量。收集过敏病人血清,采用免疫印迹(western-blotting)法鉴定其变应原成分,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果长穗鱼尾葵花粉有30余条蛋白带,其中主要条带有18条,12000和14000 mr为长穗鱼尾葵花粉特异性变应原;短穗鱼尾葵花粉有30余条蛋白带,其中主要条带有9条,26000、12000和14000 mr为短穗鱼尾葵花粉特异性变应原,其中14000 mr为主要变应原;通过离子交换层析方法纯化出长穗鱼尾葵花粉相对分子质量为12000和14000的变应原主要分布在ⅱ峰中,短穗鱼尾葵花粉相对分子质量为14000的主要变应原分布在ⅴ峰和ⅵ峰中。结论对长穗和短穗鱼尾葵花粉变应原进行了初步的分离、鉴定和纯化,为临床鱼尾葵花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。
牛奶过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 袁小平, 刘志刚, 吉坤美 主题: 牛奶, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2008
摘要: 对牛奶过敏原进行分离、鉴定与纯化。通过sds-page电泳分离牛奶的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对牛奶过敏原进行初步纯化。结果表明,鲜牛奶粗提液sds-page显示蛋白条带有12条,奶粉粗提液sds-page显示出的蛋白条带与鲜牛奶的蛋白条带基本一致。鲜牛奶western-blotting显示14ku的阳性条带。离子交换层析可初步纯化出14ku的过敏原蛋白。本研究对牛奶过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出牛奶的主要过敏原。
紫红笛鲷过敏原的提取、分离及其免疫学特性鉴定
作者: 李荔, 吴曾闵, 刘志刚 主题: 紫红笛鲷, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2008
摘要: 目的对紫红笛鲷过敏原进行提取、分离及免疫学特性鉴定。方法新鲜紫红笛鲷经预处理后用pbs缓冲液制备总蛋白粗浸液,sds-page分析紫红笛鲷总蛋白的组成,免疫印迹(western-blotting)分析紫红笛鲷过敏原,通过离子交换层析对总蛋白粗浸液进行分离并鉴定不同组份的免疫学特性。结果紫红笛鲷可溶性蛋白粗提液sds-page显示有20条蛋白条带,对鱼过敏病人的阳性混合血清能与其中7个条带反应,分子量分别是42000,36000,30000,27000,25000,17000和12000mr。离子交换层析后分子量为42000、36000、12000mr的阳性过敏原蛋白具有免疫学活性。结论本实验对紫红笛鲷过敏原进行了提取、分离和免疫学特性鉴定,离子交换层析技术可以用于紫红笛鲷过敏原蛋白的分离纯化,为紫红笛鲷过敏原的进一步研究和鱼类食品过敏的防治奠定了理论基础。
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