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德国小蠊重组变应原(rBla g 2)治疗过敏性哮喘小鼠的实验研究
作者: 沈小英, 朱清仙, 刘志刚, 李湘辉 主题: 德国小蠊, 重组变应原, 哮喘, 嗜酸粒细胞, B淋巴细胞瘤/白血病-2 年份: 2009
摘要: 目的探讨重组德国小蠊变应原(rblag2)治疗过敏性哮喘小鼠的效果及机制。方法18只balb/c小鼠随机均分为阴性对照组(a组)、哮喘模型组(b组)和重组蛋白rblag2治疗组(c组)。b、c两组分别腹腔注射经al(oh)3佐剂乳化的重组蛋白rblag2,剂量为50mg/(只·次),共3次,每次间隔1周。a组以50ml生理盐水代替变应原。末次致敏后2周,进行免疫治疗,c组腹腔注射rblag2,100mg/(只·次),每两天1次,连续8次。a、b两组以pbs代替变应原。末次治疗后1周,将小鼠麻醉,b、c两组每鼠每天滴鼻50mgrblag2,连续7d。a组以pbs代替变应原滴鼻。于最后1次滴鼻后24h检测各项指标:各组小鼠气道高反应性,支气管肺泡灌洗液(balf)中细胞总数和细胞种类以及血清中rblag2抗原特异性ige和igg2a的变化;he染色观察小鼠肺组织的改变,免疫组化检测肺嗜酸粒细胞(eos)b淋巴细胞瘤/白血病-2(bcl-2)的表达。结果与b组相比,c组气道高反应检测中扩大间隙(penh)值下降(p<0.05);血清中rblag2特异性ige降低,igg2a增加(p<0.01);c组eos细胞阳性数量明显减少,且bcl-2蛋白阳性表达较弱。b组balf的细胞总数和eos数分别为(24.60±15.08)×105个/ml和(22.20±3.76)×105个/ml,而c组细胞总数[(14.30±4.95)×105个/ml]和eos数[(5.20±1.56)×105个/ml]显著减少(p<0.01)。b组肺部气管周围炎性细胞聚集,肺组织上皮损伤,组织水肿,而c组肺部变应性炎症明显减轻。与a组相比,c组各项检测指标接近a组。结论rblag2对小鼠过敏性哮喘有治疗作用,可能是eos细胞凋亡在其中起重要作用。
标准化粉尘螨疫苗免疫治疗哮喘小鼠气道炎症的实验研究
作者: 刘晓宇, 闫浩, 李盟, 李荔, 刘志刚, 喻海琼 主题: 粉尘螨, 疫苗, 哮喘, 免疫治疗, 机理 年份: 2011
摘要: 目的建立小鼠粉尘螨过敏性哮喘模型,探讨标准化粉尘螨疫苗免疫治疗的疗效及机理。方法 32只balb/c小鼠随机分为阴性对照组(a组)、哮喘模型组(b组)、粉尘螨疫苗低剂量治疗组(c组)、粉尘螨疫苗高剂量治疗组(d组)。a组始终给予生理盐水,b、c、d组腹腔注射50μg粉尘螨提取液和2 mg al(oh)3免疫小鼠致敏。然后分别用pbs(50μl)、100μg、1 mg的粉尘螨粗提液皮下注射进行免疫治疗,各组用粉尘螨抗原(50μg/50μl)滴鼻激发,末次激发后24 h用气道高反应仪检测小鼠气道反应性;处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(balf)、血清以及取出小鼠的脾细胞进行后续检测。结果 b组、c组肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性细胞数显著升高,气道反应性明显增强,两组相比无显著性差异。与之相比,d组气道反应性明显下降,肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性细胞数显著降低(p<0.01)、der.f特异性抗体ige显著降低、支气管肺泡灌洗液上清中il-4降低(p<0.05),il-10、ifn-r的含量显著增高(p<0.05),细胞增殖反应显示d组受抑制。结论粉尘螨疫苗可以有效抑制哮喘模型肺部炎症变化和降低气道高反应性,其疗效与剂量有关,机制可能与调节th1/th2平衡有关。
PLGA-蒿属花粉纳米疫苗对小鼠过敏性哮喘治疗作用及机制的实验研究
作者: 刘玉琳, 杨慧, 余克花, 刘志刚, 崔晓民 主题: 聚乳酸-羟基乙酸共聚物, 哮喘, 蒿属花粉, 纳米粒子, 免疫治疗 年份: 2010
摘要: 目的研究以聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(d,l-lactic-co-glycolic)acid,plga]为佐剂制备的蒿属花粉纳米疫苗对小鼠过敏性哮喘模型气道炎症治疗的疗效,并探讨其免疫治疗机制。方法40只小鼠随机分为5组:对照组、模型组、空白粒子治疗组(治疗a组)、蒿属花粉粗浸液治疗组(治疗b组)、plga-蒿属花粉治疗组(治疗c组)。用蒿属花粉建立哮喘模型。对照组用生理盐水代替致敏。elisa法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(balf)和脾细胞培养上清液(sccs)中il-4,ifn-γ的含量;收集balf进行总细胞计数和嗜酸性粒细胞计数;he染色观察各组小鼠肺组织病理变化。结果肺部组织学和balf中细胞计数结果显示,与模型组相比,b、c组的肺部嗜酸性粒细胞浸润显著减轻,balf中总细胞和嗜酸性细胞显著减少;细胞因子的测定结果显示,在balf中,模型组的il-4和ifn-γ分别为(88.71±6.82)pg/ml和(24.14±2.91)pg/ml,与之相比,蒿属花粉粗浸液治疗组(40.07±2.42)pg/ml和plga-蒿属花粉治疗组(38.31±6.28)pg/ml的il-4显著降低(p<0.01);plga-蒿属花粉治疗组(63.69±8.0)pg/ml的ifn-γ显著升高(p<0.01);在sccs中,模型组的il-4和ifn-γ分别为(81.02±12.5)pg/ml和(34.12±4.64)pg/ml,与之相比,蒿属花粉粗浸液治疗组(58.91±9.10)pg/ml和plga-蒿属花粉治疗组(41.30±4.75)pg/ml的il-4分泌显著减少(p<0.01);plga-蒿属花粉治疗组(82.50±5.63)pg/ml的ifn-γ显著增高(p<0.01)。结论plga-蒿属花粉纳米疫苗免疫治疗小鼠哮喘有良好疗效。其机制可能与调节th1/th2平衡有关。
树突状细胞和哮喘
作者: 喻海琼, 刘志刚 主题: 树突细胞, 抗原呈递细胞, 哮喘, Th2细胞 年份: 2006
摘要: 哮喘已成为影响人们日常生活的重要疾病,其发病率有上升的趋势。哮喘为气道的慢性炎症,表现为气道高反应性和气道阻塞。树突状细胞是主要的抗原呈递细胞,可调节获得性免疫反应,指导原始t细胞分化为th1和th2效应细胞。th2细胞通过分泌炎性因子在炎症反应中发挥关键的作用。另外,树突细胞还介导抗原特异性耐受或无反应。它在哮喘发病中的作用日益受到人们的重视。探讨哮喘可能的治疗方法而对树突细胞进行研究是很有必要的。本文将就树突细胞在哮喘发病中的机理作一阐述。
重组Bla g2变应原诱导小鼠变态反应气道炎症动物模型的建立
作者: 许卓谦, 刘志刚, 喻海琼, 于琨瑛, 丘劲 主题: 德国小蠊重组蛋白, 动物模型, 哮喘 年份: 2006
摘要: 目的建立重组德国小蠊变应原blag2(rblag2)诱导的小鼠变态反应气道炎症动物模型。方法在大肠杆菌中诱导表达blag2重组蛋白,用镍亲和柱层析法提纯重组蛋白;24只balb/c小鼠随机分为德国小蠊粗浸液组(a组)、德国小蠊粗浸液+重组blag2组(b组)、重组blag2(c组)、阴性对照组(d组)。分别通过he染色和pas染色(periodicacid-schiff)观察小鼠肺部炎症和黏液分泌;观察支气管肺泡灌洗液(balf)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(elisa)检测balf、脾细胞培养上清的细胞因子和血清rblag2特异的ige、igg1、igg2a抗体。结果成功表达、纯化blag2重组蛋白;a、b与c组肺部病理改变呈现明显的变态反应性炎症;balf中的细胞总数、中性粒细胞数、eos计数、il-4、血清抗原特异性ige抗体、igg1抗体和脾细胞分泌il-4均显著高于阴性对照组(p<0.01)。结论用rblag2能成功建立小鼠变态反应气道炎症动物模型。
蟑螂变应原诱导小鼠肺部变应性炎症动物模型的研究
作者: 许卓谦, 刘志刚, 于琨瑛, 喻海琼, 丘劲 主题: 蟑螂变应原, 动物模型, 哮喘 年份: 2006
摘要: 目的建立美洲大蠊提取液(cae)诱导的小鼠变应性气道炎症动物模型。方法24只balb/c小鼠随机分为正常对照组(c组)和美洲大蠊粗浸液2个剂量组低剂量50μg组(a组)、高剂量100μg组(b组),8只/组。通过he染色和pas染色观察小鼠肺部炎症和黏液分泌;观察支气管肺泡灌洗液中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验检测balf、脾细胞培养上清液的细胞因子和血清cae特异的ige、igg1、igg2a抗体。结果a、b组与对照组c组比较,可诱导肺组织出现明显的气道变态反应性炎症,肺组织炎症病理评分有显著性差异(p<0.01);balf中的细胞总数、eos计数、中性粒细胞数、il-4,血清抗原特异性ige抗体、igg1抗体和脾细胞分泌il-4均显著高于正常对照组c组(p<0.01);且balf中的嗜酸性粒细胞计数和il-4水平与美洲大蠊粗浸液的使用剂量有关(p<0.01)。结论美洲大蠊提取液能成功建立小鼠变态反应气道炎症动物模型,且呈剂量依赖性,高剂量能更有效诱导气道变态反应性炎症。
室内空调机滤尘网及空气中浮动尘螨变应原的测定
作者: 练玉银, 刘志刚, 王红玉, 蔡成郁, 刘晓宇 主题: 尘螨, 变应原, 空调, 哮喘, 浮动空气 年份: 2007
摘要: 目的检测开空调机前后室内空气中及空调机滤网灰尘中尘螨主要变应原的浓度,探讨空调机滤网中的尘螨变应原与哮喘发病的关系。方法采集开空调机前后哮喘患者和健康者家庭卧室空气中的灰尘及空调滤网灰尘,分别用elisa检测其粉尘螨1组变应原(derf1)、屋尘螨1组变应原(derp1)和尘螨2组变应原(der2)的浓度。结果哮喘患者家庭空调开机前空气中derp1、derf1和der2的浓度分别为(0.23±0.13)、(2.62±1.08)和(0.93±0.41)ng/m3,开机后依次为(0.56±0.25)、(4.74±1.22)和(2.33±0.64)ng/m3,开机前后相比,三者浓度差异均有统计学意义(p<0.05);健康者家庭空调开机前空气中derp1、derf1和der2的浓度分别为(0.33±0.11)、(11.5±3.08)和(2.1±0.8)ng/m3,开机后分别为(0.63±0.23)、(19.8±4.3)和(3.6±1.0)ng/m3,开机前后相比,三者浓度差异均有统计学意义(p<0.05)。空调滤网灰尘中derp1、derf1和der2的浓度,哮喘患者家庭分别为(0.52±0.19)、(3.34±0.63)和(2.53±0.65)μg/g灰尘,健康者家庭分别为(1.30±0.35)、(5.16±0.92)和(3.47±1.13)μg/g灰尘。空调滤网灰尘中尘螨主要变应原浓度,健康者家庭和哮喘患者家庭的derf1和der2浓度均大于使过敏人群致敏的尘螨主要变应原浓度阈值2μg/g灰尘。结论空调滤网灰尘中存在尘螨抗原,是室内尘螨变应原的重要来源之一,是引起过敏性哮喘的诱因之一。
PLGA为佐剂的OVA纳米疫苗皮下注射可预防小鼠过敏反应性气道炎症和调节Th1/Th2反应
作者: 喻海琼, 刘志刚, 曾琼 主题: 哮喘, OVA, PLGA, Th1/Th2反应 年份: 2007
摘要: 目的探讨聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(d,l-lactic-co-glycolic)acid,plga]包裹的卵清蛋白(ova)纳米疫苗(pom)对哮喘小鼠的免疫治疗效果。方法包裹不同剂量(低、中、高)的ova纳米粒子和对照(ova、空白纳米粒子、pbs)通过皮下注射给予小鼠,再用ova进行致敏和激发,通过肺组织学、支气管肺泡灌洗液(balf)细胞计数、测定balf和脾细胞培养上清液中细胞因子的含量,观察小鼠呼吸道炎症和免疫学改变。结果肺部组织学和balf中细胞计数结果显示,与pbs对照组相比,ova治疗组、中剂量和高剂量ova纳米组的肺部嗜酸性浸润显著减轻,balf中总细胞和嗜酸性细胞显著减少。细胞因子测定结果显示,与pbs对照组相比,中、高剂量ova纳米组的balf和脾细胞培养上清液中ifn-γ显著升高,il-4水平显著降低。ova治疗组中il-4水平显著下降,而ifn-γ水平无显著差异。结论ova纳米疫苗可预防哮喘嗜酸性气道炎症,其可能的机制之一是调节了过敏性哮喘的th1/th2失平衡反应。
粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻免疫治疗小鼠过敏性哮喘的实验研究
作者: 国华, 朱清仙, 刘志刚, 喻海琼, 李湘辉 主题: 粉尘螨, 壳聚糖, 哮喘, 鼻腔免疫治疗 年份: 2008
摘要: 探讨粉尘螨壳聚糖疫苗经鼻粘膜免疫治疗过敏性哮喘的疗效。用粉尘螨(dermatophagoides farinae,df)提取液致敏、激发balb/c小鼠,复制哮喘模型,24只balb/c小鼠随机分为空白对照组(a组)、模型组(b组)、粉尘螨对照组(c组)粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组(d组)。检测各组气道高反应性;通过he(haematoxylin and eosin)染色观察小鼠肺部炎症;观察支气管肺泡灌洗液(balf)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(elisa)检测balf、脾细胞培养上清的细胞因子和血清中df特异性的ige、igg2a抗体。粉尘螨和粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组肺部变态反应性炎症病理变化较模型组明显减轻,气道高反应性penh值下降;balf中的细胞总数、嗜酸粒细胞(eos)计数、il-4、血清抗原特异性ige抗体和脾细胞分泌il-4均明显低于模型组,而且总体作用粉尘螨壳聚糖疫苗治疗组要强于粉尘螨对照组。粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻腔免疫可以治疗小鼠过敏性哮喘,且作用强于单独应用粉尘螨的对照组。
支气管哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子与转录活化因子1表达及其对气道炎症的调控
作者: 李国平, 熊瑛, 刘志刚, 钟南山 主题: 哮喘, 上皮细胞, 气道炎症, 信号转导子与转录活化因子1, 胞间黏附分子1 年份: 2004
摘要: 目的 研究信号转导子与转录活化子 1(stat 1)在支气管哮喘 (简称哮喘 )中的表达及stat 1对哮喘气道炎症调控 ,以探讨stat 1信号传导途径在哮喘发病机制中的作用。方法 4 8只豚鼠随机分为正常对照组 (a组 ,8只 )、哮喘组 (b组 )和地塞米松预防组 (c组 ,8只 ) ,哮喘组又随机分为b1、b2 、b3 、b4组 (每组各 8只 )。b组与c组用 10 %卵蛋白 (ova)腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作 ,在激发后 0h、2 4h、72h、5d通过免疫组化测定豚鼠哮喘模型肺组织中stat 1与胞间黏附分子 1(icam 1)表达 ,免疫印迹检测stat 1磷酸化 ,测定豚鼠哮喘模型支气管肺泡灌洗液 (balf)中细胞总数、嗜酸粒细胞计数 ,用酶联免疫吸附法检测γ干扰素 (ifn γ)的浓度。结果 a组气道上皮细胞stat 1与icam 1积分吸光度分别为 13± 7、2 1± 8,而哮喘组 (b1~ 4组 )豚鼠在激发各个时间点 (0h、2 4h、72h、5d)其气道上皮细胞stat 1与icma 1的积分吸光度分别为 5 7± 9、136± 14、95± 2 1、6 7±30 ;75± 10、16 6± 17、113± 14、87± 2 1。b1~ 4组与a组比较差异有显著性 (p <0 0 1) ;气道上皮细胞stat 1积分吸光度变化与嗜酸粒细胞动态变化呈正相关 (r=0 6 5 2 ,p <0 0 1) ;stat 1积分吸光度与icma 1积分吸光度呈正相关 (r=0 5 5
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