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椰子花粉过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 孟光, 李春林, 刘志刚, 肖淑英, 姚敏 主题: 椰子花粉, 变应原, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对椰子花粉的变应原组分进行初步的分离、鉴定及纯化。方法提取椰子花粉粗提液,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离椰子花粉的蛋白质组分并测定其相对分子质量,采用免疫印迹法鉴定其变应原成分,并通过离子交换层析对椰子花粉变应原进行初步分离纯化,免疫印迹进行检测。结果sds-page显示椰子花粉粗提液有10条蛋白带,其中相对分子质量(mr)为60 000、50 000、35 000、28 000、19 000、16 000和14 000的蛋白可与椰子花粉过敏性病人血清ige结合,且mr50 000、16 000和14 000为主要变应原;离子交换层析结果显示主要过敏原成分主要分布在ⅴ峰中。结论对椰子花粉变应原进行了初步的分离、鉴定和纯化,为临床椰子花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。
豚草花粉过敏原的分析、鉴定与纯化
作者: 谢水祥, 朱清仙, 邬玉兰, 刘志刚, 韩立民 主题: 豚草花粉, 变应原, 分析 年份: 2010
摘要: 目的对豚草花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。方法提取豚草花粉粗提液,sds-page分离其蛋白组分并测定分子量,western-blotting鉴定其变应原组分,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果豚草花粉有30条蛋白带,其中主要条带有9条,70kda、40kda为其特异性变应原。经离子交换层析纯化出豚草花粉相对分子量为40kda的变应原主要分布在ⅰ峰。结论豚草花粉粗提液中主要变应原为70kda、40kda蛋白组分。
热带无爪螨体内特异性变应原定位
作者: 吴桂华, 刘志刚, 孙新, 杨峰巍 主题: 热带无爪螨, 变应原, 抗原定位, 免疫组织化学, HE染色 年份: 2009
摘要: 【目的】探讨热带无爪螨blomia tropicalis特异性变应原在体内的定位。【方法】制作热带无爪螨石蜡切片,he染色后光镜观察其内部形态结构。选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性ige抗体作探针,免疫组织化学染色分析其特异性抗原存在位置。【结果与结论】免疫组织化学染色可见热带无爪螨中肠、盲囊、结肠的肠壁和内容物及生殖腺等均有阳性反应。其中肠壁组织和肠腔内容物呈强阳性反应,提示肠为特异性抗原的主要存在部位。
红星梭子蟹变应原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫学鉴定
作者: 吴凯威, 刘志刚 主题: 红红星梭子蟹, 变应原, 原肌球蛋白, 基因克隆, 表达, MALDI-TOF-MS质谱 年份: 2009
摘要: 克隆、表达红星梭子蟹蟹肉中变应原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫学特性进行鉴定。rt-pcr克隆红星梭子蟹(portunus sanguinolentus)蟹肉中变应原原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增蟹tropomyosin的完整开放阅读框,与pet-28a载体连接并转化大肠杆菌escherichia.colibl21(de3),诱导表达后,ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,western-blot检测其免疫学活性,胰酶消化后进行maldi-tof-ms质谱分析鉴定。克隆所得蟹tropomyosin基因包括一个编码285个氨基酸的开放阅读框。序列分析结果显示所克隆得到的基因与已知虾、螨、蟑螂等的tropomyosin变应原基因有较高的同源性(>80%)。根据变应原的命名规则,将其命名为pors1,并提交genbank数据库,登录号为ef143836。重组蟹tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,表达产物经ni2+亲和层析柱纯化后进行western-blot检测,结果显示该重组蛋白具有良好的免疫学活性,maldi-tof-ms质谱分析进一步证实了该重组变应原的正确性。本研究成功克隆和表达了红星梭子蟹变应原tropomyosin,为蟹过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。
王棕花粉变应原的分析与鉴定
作者: 孟光, 姚敏, 刘志刚, 宋娟娟, 李春林 主题: 王棕花粉, 变应原, SDS-PAGE, Western-blot 年份: 2009
摘要: 目的对我国南方常见的棕榈科植物王棕花粉(roystonea regia pollen)变应原蛋白进行分离、分析与鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供基础。方法取常规方法制备的王棕花粉浸出液,采用sds-page分离王棕花粉蛋白质组分,测定其相对分子量,同时用10例对王棕花粉过敏的患者血清作western-blot鉴定其变应原及主要变应原成分。结果sds-page显示王棕花粉有10条可辨蛋白带,其中主要条带有8条,分别为100000、66000、38000、36000、29000、30000、24000、16000和14000mr,western-blot结果表明,10例王棕花粉过敏患者血清全部呈阳性反应,有66000、24000、16000和14000mr共4条致敏条带,其中分子量在16000和14000mr的蛋白为主要变应原。结论王棕花粉变应原的分析与鉴定为临床王棕花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。
口虾蛄原肌球蛋白基因表达及变应原性鉴定
作者: 詹政科, 刘志刚, 吉坤美 主题: 口虾蛄, 变应原, 原肌球蛋白, 克隆表达 年份: 2009
摘要: 目的克隆口虾蛄原肌球蛋白(tropomyosin)基因并表达纯化出重组蛋白,研究其变应原性。方法提取口虾蛄总rna,设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体pet-28a上,转化到e.colibl21(de3)后,经异丙基-b-d-硫代乳糖苷(iptg)诱导表达,用ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化。采用免疫印迹(western-blot)检测其与对虾过敏的患者血清ige结合活性。结果经序列测定,该基因含有长度为855bp的开放阅读框,编码284个氨基酸(genbank登录号为ef584510)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)检测该重组变应原在大肠埃希菌中高效表达36kda的目的蛋白,且重组变应原具有良好的ige结合活性。结论本研究成功获得了具有变应原活性的重组口虾蛄原肌球蛋白。
谷跗线螨交叉反应性变应原的定位
作者: 赵学影, 赵振富, 孙新, 刘志刚, 吕艳思 主题: 谷跗线螨, 跗线螨科, 变应原, 抗原定位, 免疫组织化学, HE染色, 交叉反应性 年份: 2011
摘要: 为明确谷跗线螨tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,he染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性ige抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。he染色显示谷跗线螨的消化系统占据其体腔的大部分,包括口咽部、中肠、后肠、肛门和唾液腺等结构。免疫组织化学染色显示谷跗线螨的口咽部、中肠、肠内容物、肠壁及生殖腺等均有阳性反应。谷跗线螨体内存在可诱发人体ige抗体的变应原,变应原在其体内的分布格局与屋尘螨dermatophagoides pteronyssinus基本一致。
克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定
作者: 易海涛, 夏立新, 刘芳, 闫浩, 黄钟, 汤慕瑾, 陈大玮, 刘志刚 主题: 克氏原螯虾, 原肌球蛋白, 变应原, 克隆表达, 纯化, 免疫印迹, 酶联免疫吸附测定 年份: 2011
摘要: 克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆得到目的基因;将目的基因连入pmd19-t载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中;iptg诱导表达;通过ni2+亲和层析(fplc)纯化目的蛋白;利用western-blotting和elisa检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.western-blotting和elisa结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中ige结合,具有免疫原性.
重阳木花粉过敏原的分离、纯化和鉴定
作者: 姚敏, 刘志刚, 孟光, 孔小丽 主题: 重阳木花粉, 变应原, 离子交换柱层析 年份: 2011
摘要: 目的对重阳木花粉变应原蛋白进行分离、纯化和鉴定。方法采用coca s液提取重阳木花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离粗提液蛋白质组分,并测定其分子质量;收集过敏患者血清,用western blot法鉴定其变应原成分;通过离子交换层析对重阳木花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果分离得到重阳木花粉18条蛋白带,其中分子质量为12和14 ku的是重阳木花粉的特异性变应原,通过离子交换柱层析方法纯化得到其相应的纯化蛋白。结论对重阳木花粉变应原进行了初步的分离、纯化和鉴定,为临床重阳木花粉过敏疾病的诊断和治疗奠定了基础。
椰子花粉过敏原profilin蛋白体外重折叠过程的光谱学研究
作者: 罗海梅, 肖杰, 邬玉兰, 刘志刚, 徐宏 主题: 椰子花粉, 变应原, Profilin, 体外重折叠, 透析, 生物信息学 年份: 2010
摘要: 在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白通常都是以包涵体的形式存在。利用圆二色性光谱、荧光光谱和同步荧光光谱对尿素诱导的重组椰子花粉泛过敏原profilin蛋白包涵体的复性过程进行了系统的光谱学研究,得到了profilin蛋白复性过程的光谱学特征;结合生物信息学方法,通过对profilin蛋白的二级结构和三级结构的预测,进一步分析了复性过程中profilin蛋白构象变化的特点,初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白复性程度的光谱学实验方法,为重组蛋白包涵体复性机理的深入研究进行了有益的探索。
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