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花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定
作者: 易海涛, 刘志刚, 闫浩, 刘芳, 赵郭存, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Arah2.02, 克隆, 表达, 免疫印迹 年份: 2010
摘要: 通过提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生ara h2.02基因,将反转录的基因连入pmd19-t simple vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中,iptg诱导表达、western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的ige结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.
方斑东风螺过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张剑文, 刘志刚 主题: 方斑东风螺, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对方斑东风螺的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离方斑东风螺的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对方斑东风螺主要过敏原进行初步纯化。结果方斑东风螺粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示过敏患者的阳性混合血清能与其中3个蛋白条带起反应,相对分子质量分别是56000、28000和22000。离子交换层析可初步纯化出28000和22000的过敏原蛋白。结论本实验对方斑东风螺过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出方斑东风螺的主要过敏原。
斑节对虾过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 张慧, 刘志刚 主题: 斑节对虾, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对斑节对虾的主要过敏原进行分析、鉴定与纯化。方法通过sds-page电泳分离斑节对虾的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对斑节对虾主要过敏原进行初步纯化。结果斑节对虾粗提液sds-page显示其主要蛋白条带主要有7条,western-blotting显示对斑节对虾过敏患者的阳性混合血清能与7个蛋白条带起反应,相对分子质量分别为71000、43000、34000、23000、21000、20000和19000,离子交换层析可初步纯化出相对分子质量为34000和21000的过敏原蛋白。结论本实验对斑节对虾过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出斑节对虾的主要过敏原。
花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
作者: 易海涛, 刘志刚, 刘芳, 闫浩, 汤慕瑾, 肖小军, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Ara h 8, 克隆表达, 纯化, 免疫印迹 年份: 2011
摘要: 目的:克隆花生主要过敏原ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生ara h 8基因;将反转录的基因连入pmd19-t simple vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中;iptg诱导表达;通过ni2+亲和层析(fplc)纯化目的蛋白ara h 8;western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中ige结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。
克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定
作者: 易海涛, 夏立新, 刘芳, 闫浩, 黄钟, 汤慕瑾, 陈大玮, 刘志刚 主题: 克氏原螯虾, 原肌球蛋白, 变应原, 克隆表达, 纯化, 免疫印迹, 酶联免疫吸附测定 年份: 2011
摘要: 克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆得到目的基因;将目的基因连入pmd19-t载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中;iptg诱导表达;通过ni2+亲和层析(fplc)纯化目的蛋白;利用western-blotting和elisa检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.western-blotting和elisa结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中ige结合,具有免疫原性.
Ser~(411)磷酸化p70~(S6k)的细胞免疫化学定位
作者: 夏立新, 刘志刚, 吴子斌 主题: p70~(S6K), Ser~(411)磷酸化, 细胞免疫荧光染色, 免疫印迹 年份: 2006
摘要: 培养nih3t3细胞,结合免疫印迹和细胞免疫荧光染色法,对p70的s6激酶(p70~(s6k))及其第411位丝氨酸(ser~(411))处于磷酸化状态的细胞定位进行研究.利用免疫荧光染色技术,发现p70~(s6k)存在于细胞的各个部分,而ser~(411)磷酸化后的p70~(s6k)只存在细胞核内.将细胞核与细胞质分离,并利用抗磷酸化ser~(411)的抗体进行免疫印迹分析,发现只有细胞核部分才出现免疫条带,说明ser~(411)磷酸化后的p70~(s6k)特异性地存在于细胞核当中.
不同温度下鱼类食品过敏原免疫学特性分析
作者: 徐飞龙, 吴海强, 刘志刚 主题: 食品过敏原, 生熟鱼类, 总蛋白, 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE), 免疫印迹 年份: 2006
摘要: 目的研究鱼类食品在生熟状态下的过敏原组分,分析其热稳定性过敏原。方法4种新鲜鱼类经不同温度处理后去鳞、内脏和鱼骨,在预冷丙酮中破碎,脱脂,coca’s液提取其生熟总蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离,考马斯亮蓝显色分析其总蛋白组成,用鱼过敏患者血清对不同温度条件下的鲩鱼总蛋白进行免疫学特征分析。结果sds-page显示,生熟鱼总蛋白提取物中均含有多种蛋白,经高温处理后熟鱼总蛋白组分相对减少。免疫印迹试验结果表明,加工温度、时间对鱼类食品过敏原有显著影响。结论鱼类食品中含有热稳定的过敏原,即使加工后仍具有致敏性。
猫过敏原Fel d1基因的克隆、表达及特性鉴定
作者: 许卓谦, 刘志刚 主题: 过敏原, 原核表达载体, 重组蛋白, 基因序列, 克隆人, 过敏性疾病, 重组质粒, 高效表达, 特性鉴定, 免疫印迹 年份: 2006
摘要: <正>猫过敏原是引起过敏性疾病(如哮喘、过敏性鼻炎)的常见吸人性过敏原之一,fel d1是猫的主要过敏原之一。为此,我们对fel d1 i链和ⅱ链进行克隆,构建fel d1ⅱ链+i链pet表达载体,表达重组蛋白并分析其免疫学特性。
缢蛏过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 李荔, 李启沅, 刘志刚, 余晓 主题: 缢蛏, 过敏原, 聚丙烯酰胺凝胶电泳, 免疫印迹, 高压液相色谱 年份: 2007
摘要: 以磷酸盐缓冲液提取蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)对其抗原成分进行分析,选用缢蛏过敏患者的阳性血清进行免疫印迹,鉴定出主要与次要过敏原.用高压液相色谱(hplc)纯化主要过敏原蛋白,鉴定其免疫活性,结果表明,缢蛏粗提液sds-page显示有18条蛋白条带,含量高的蛋白有6条,其分子量分别为110kd、55kd、42kd、38kd、35kd和28kd,其中以35kd处最为富集.经western-blotting鉴定,58kd蛋白为缢蛏的主要过敏原,38kd、28kd和12kd蛋白为缢蛏的次要过敏原.hplc体积排阻纯化后得9个峰,以sds-page检测,58kd的蛋白位于第4峰,其中有一条明显的蛋白条带.将该蛋白条带用hplc反相纯化,得到两个峰.经western-blotting鉴定,58kd的主要过敏原位于反相纯化的第2峰.
牛奶过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 袁小平, 刘志刚, 吉坤美 主题: 牛奶, 过敏原, SDS-PAGE, 免疫印迹, 离子交换层析 年份: 2008
摘要: 对牛奶过敏原进行分离、鉴定与纯化。通过sds-page电泳分离牛奶的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对牛奶过敏原进行初步纯化。结果表明,鲜牛奶粗提液sds-page显示蛋白条带有12条,奶粉粗提液sds-page显示出的蛋白条带与鲜牛奶的蛋白条带基本一致。鲜牛奶western-blotting显示14ku的阳性条带。离子交换层析可初步纯化出14ku的过敏原蛋白。本研究对牛奶过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出牛奶的主要过敏原。
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