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大黄鱼过敏原的提取、分离及免疫学特性鉴定
作者: 杨睿, 吴海强, 刘志刚 主题: 大黄鱼(Pseudosciaena crocea), 过敏原, 提取与纯化, 免疫活性, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 目的提取、分离大黄鱼特异性过敏原成分,并对其免疫学特性进行鉴定。方法采用coca’s提取液提取大黄鱼蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析大黄鱼总蛋白的组成,以对鱼过敏患者阳性血清为一抗,western-blotting分析大黄鱼中的过敏原;阴离子交换层析对大黄鱼总蛋白进行初步分离,western-blotting分析各个组份的免疫学活性。结果大黄鱼粗浸液蛋白分子量在8~116kd之间;western-blotting检测到分子量为54、29、27和14kd的过敏原;通过离子交换层析分离,过敏原蛋白的相对含量有显著提高,且大多都保持原有的免疫学活性。结论研究发现了大黄鱼中多种过敏原并对其免疫学活性进行了鉴定。
笔架茶色素的提取、鉴定及稳定性研究
作者: 王晓娟, 吴海强, 李静, 刘志刚 主题: 笔架茶, 色素, 提取, 稳定性试验, 鉴定 年份: 2010
摘要: 提取笔架茶色素并对其进行鉴定和稳定性分析。以清远笔架茶为原料,用加热和有机溶剂萃取法制取茶色素,分析提取时间(a)、料液比(b)对笔架茶色素提取率(α)的影响,采用三氯化铁试剂等方法对其进行鉴定,并分析酸碱、光和加热等外界因素对笔架茶色素稳定性的影响。a和b对笔架茶色素提取率的影响各不相同,优化提取条件为a1∶30,b30min,α为4.966%,鉴定结果表明笔架茶色素主要成分为多酚类衍生物和黄酮类化合物,该类茶色素在酸性条件下对光和热的稳定性较高。笔架茶色素主要成分为茶黄素和茶红素,在酸性条件下稳定性较高,为笔架茶资源的进一步研究及开发提供理论支持。
鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定
作者: 吴序栎, 杨志华, 刘志刚, 吴海强 主题: 鸡蛋, 过敏原, 基因克隆, 表达, Gald3 年份: 2009
摘要: 目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原gal d 3基因并检验其免疫活性。方法:提取鸡蛋的总rna,采用rt- pcr方法扩增出目的基因片段,将其克隆入t载体中进行测序和分析。设计带有酶切位点的特异性引物,采用rt- pcr获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pet-28a中进行诱导表达。通过ni~(2+)亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(western blotting)方法检测其ige结合活性。结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原gal d 3。基因开放阅读框为2118个碱基(包括终止密码子),编码705个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000。表达产物经亲和层析纯化,用western blotting方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性。结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原gal d 3基因,该蛋白具有良好的免疫原性。
Ca~(2+)离子对榛子过敏原Cor h 1二级结构和抗原活性影响研究
作者: 吴海强, 王晓娟, 邬玉兰, 张昉, 刘志刚 主题: 榛子, rCor h 1, Ca2+结合特性, 圆二色谱, ELISA, 抗原活性 年份: 2012
摘要: 目的:研究ca2+离子对非cabps蛋白类过敏原二级结构和抗原活性的影响。方法:以重组榛子主要过敏原cor h 1为研究对象,用圆二色谱(cd)研究了系列浓度的ca2+和edta各自存在情况下,不同蛋白浓度溶液中rcor h 1二级结构的变化及规律,并以榛子过敏患者血清为一抗,用elisa实验分析了ca2+和edta对rcor h 1抗原活性的影响。结果:在高浓度rcor h 1溶液中ca2+的加入可以引起椭圆率的增加,而在低浓度的rcor h 1溶液中则引起椭圆率的降低;edta在高浓度和低浓度的rcor h 1溶液中均能引起rcor h 1二级结构相对含量的降低;椭圆率增加(或降低)的幅度与ca2+、edta终浓度成正比。elisa实验表明ca2+和edta都能显著降低rcor h 1的抗原活性。结论:ca2+离子可以显著影响rcor h 1的二级结构,降低其抗原活性,为非cabps蛋白类低致敏原的研究奠定了较好的前期研究基础。
pH值和酶作用对鲩鱼过敏原免疫学活性的影响研究
作者: 吴海强, 徐飞龙, 王晓娟, 刘志刚 主题: 鲩鱼, pH值, 胃蛋白酶, 胰蛋白酶, 过敏原, 免疫学特性 年份: 2010
摘要: 目的研究ph值、胃蛋白酶和胰蛋白酶作用对鲩鱼过敏原免疫学活性的影响。方法采用不同coca's液提取制备鲩鱼总蛋白,以鲩鱼过敏患者阳性血清为一抗用western blotting方法分析ph值、胃蛋白酶和胰蛋白酶以及多因素多重作用对鲩鱼过敏原免疫学特性的影响。结果hcl溶液、胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液以及多种因素的多重作用对鲩鱼蛋白均有不同程度的降解作用,且均可以显著降低鲩鱼过敏原的免疫学活性,但一些蛋白具有很高的稳定性,如m_r为35 000和23 000的蛋白。受制备过程的影响,鲩鱼蛋白中出现新的阳性过敏原条带,如m_r为27 000和20 000的阳性过敏原条带(ph 1.0 hcl溶液)。结论鲩鱼含有稳定性较高的潜在过敏原,该类潜在过敏原对热、酸、酶解等作用均有很强的耐受性。
不同储藏时间笔架茶生物碱成分分析
作者: 吴海强, 王晓娟, 艾梅, 刘志刚, 贺震旦 主题: 笔架茶, 生物碱, 提取, 鉴定, 咖啡因, HPLC 年份: 2010
摘要: 本实验以三种储藏时间不同的笔架茶1#、2#和3#茶为原料,用热回流法和有机溶剂萃取法联用的方法提取其生物碱,分析了热回流时间(a)和料液比(b)对三种茶生物碱提取率的影响。用m arqu is等五种试剂对提取的生物碱进行鉴定分析,并用hplc分析生物碱主要成分的含量。结果表明:笔架茶中生物碱的含量随储藏时间的延长而降低。a和b对储藏时间不同的三种笔架茶生物碱提取率的影响各不相同。沉淀及显色反应鉴定显示提取生物碱的主要成分为咖啡因,hplc定量分析表明3#新茶生物碱中咖啡因含量最高(94.33%),1#陈茶咖啡因含量最低(75.76%)。
肉桂提取物对粉尘螨杀灭的实验研究
作者: 李静, 吴海强, 刘志刚, 张彩芬, 艾梅 主题: 肉桂提取物, 粉尘螨, 杀螨 年份: 2009
摘要: 目的研究肉桂(cinnamomum cassia presl)不同溶剂提取组分对室内粉尘螨(dermatophagoides farinae)的杀灭活性。方法肉桂粉碎后以石油醚、乙酸乙酯、甲醇为提取剂,分别用索氏提取法、浸渍法提取肉桂的不同有效组分;以作用浓度和作用时间为变量,分别用直接接触法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取组分对粉尘螨的杀灭活性,用熏蒸法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组份对粉尘螨的杀灭活性。结果直接接触法测试肉桂不同组分对粉尘螨杀灭活性的结果显示作用24h时肉桂石油醚提取组分和乙酸乙酯提取组分的ld50分别为4.64μg/cm2和1.44μg/cm2,甲醇提取组分对粉尘螨则不具有显著杀灭活性;从作用时间上看,石油醚组分作用时间最短,乙酸乙酯组分次之;熏蒸法测试结果显示肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组分使用剂量为6.09μg/cm2和9.75μg/cm2时作用24h后对粉尘螨的致死率即达到100%。结论本文研究结果表明肉桂的石油醚和乙酸乙酯提取组分对粉尘螨具有良好的杀灭活性,呈剂量、时间依赖性,且与作用方式直接相关。
丁香花蕾油对粉尘螨杀灭活性的研究
作者: 李静, 吴海强, 刘志刚 主题: 丁香花蕾油, 粉尘螨, 杀螨剂 年份: 2009
摘要: 用索氏提取法以石油醚为溶剂提取制备丁香花蕾中的挥发油组分,用直接接触法和熏蒸法分别测试不同剂量和不同作用时间丁香花蕾油对粉尘螨的杀灭活性,结果显示12.20μg/cm2丁香花蕾油直接接触粉尘螨后2.5h死亡率即达100.0%,相同剂量的丁香花蕾油在相对封闭的容器中熏蒸24h后,螨虫死亡率为100.0%,表明丁香花蕾油对室内粉尘螨具有较好的杀灭活性。
Bla g 7多肽疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究
作者: 夏立新, 马慧, 刘志刚, 吴海强, 冉丕鑫, 钟南山 主题: Bla g 7, 多肽, 纳米微粒, 过敏性气道炎症, 小鼠 年份: 2009
摘要: 目的观察以壳聚糖(cs)材料为佐剂制备的德国小蠊变应原bla g 7多肽纳米疫苗对小鼠过敏性气道炎症的疗效,探讨其免疫机制。方法用cs包裹bla g 7多肽制成纳米疫苗;25只balb/c小鼠用蟑螂粗提液致敏、激发,随机分为阴性对照组(a组)、模型组(b组)、bla g 7多肽治疗组(c组)、bla g 7多肽+cs治疗组(d组)、cs对照(e组)。通过he染色观察小鼠肺部炎症;观察支气管肺泡灌洗液(balf)中细胞总数和细胞分类;气道高反应仪监测治疗前后小鼠气道高反应性的变化。结果成功制备bla g 7多肽纳米疫苗;d组与a组相比肺部病理改变不明显,balf中的细胞总数、eos计数均显著低于模型组(p<0.01),而c组和e组对致敏小鼠无明显疗效。气道高反应数值治疗前后变化差别有统计学意义(p<0.05)。结论bla g 7多肽壳聚糖纳米疫苗对致敏小鼠具有免疫治疗作用,是一种新型的治疗蟑螂过敏性气道炎症的缓释制剂,为脱敏疫苗的研究提供了理论基础。
家蚕变应原tropomyosin基因的克隆表达、纯化及其免疫学活性鉴定
作者: 刘志刚, 邬玉兰, 杨睿, 吴海强 主题: 家蚕, 重组变应原tropomyosin, 基因表达, 蛋白纯化 年份: 2009
摘要: 目的对家蚕过敏原tropomyosin基因进行克隆表达,鉴定其免疫学活性。方法本研究提取家蚕总rna,采用rt-pcr方法有效地扩增出tropomyosin片段,其长度为858bp,编码286个氨基酸。通过连入载体pet28a在大肠杆菌escherichiacolibl21(de3)菌株中通过iptg诱导得到重组家蚕原肌球蛋白。重组家蚕原肌球蛋白经过6his-tag蛋白纯化系统分离、纯化。经westernblot检测该重组蛋白与家蚕过敏患者血清中ige的反应性。结果19个病人血清反应中,有5个呈阳性,阳性率为26%。结论成功克隆表达了家蚕tropomyosin基因,经免疫学鉴定发现其具有过敏原性。
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