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大黄鱼过敏原的提取、分离及免疫学特性鉴定
作者: 杨睿, 吴海强, 刘志刚 主题: 大黄鱼(Pseudosciaena crocea), 过敏原, 提取与纯化, 免疫活性, 食物过敏 年份: 2009
摘要: 目的提取、分离大黄鱼特异性过敏原成分,并对其免疫学特性进行鉴定。方法采用coca’s提取液提取大黄鱼蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析大黄鱼总蛋白的组成,以对鱼过敏患者阳性血清为一抗,western-blotting分析大黄鱼中的过敏原;阴离子交换层析对大黄鱼总蛋白进行初步分离,western-blotting分析各个组份的免疫学活性。结果大黄鱼粗浸液蛋白分子量在8~116kd之间;western-blotting检测到分子量为54、29、27和14kd的过敏原;通过离子交换层析分离,过敏原蛋白的相对含量有显著提高,且大多都保持原有的免疫学活性。结论研究发现了大黄鱼中多种过敏原并对其免疫学活性进行了鉴定。
椰子花粉过敏原的分离、鉴定与纯化
作者: 孟光, 李春林, 刘志刚, 肖淑英, 姚敏 主题: 椰子花粉, 变应原, 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对椰子花粉的变应原组分进行初步的分离、鉴定及纯化。方法提取椰子花粉粗提液,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离椰子花粉的蛋白质组分并测定其相对分子质量,采用免疫印迹法鉴定其变应原成分,并通过离子交换层析对椰子花粉变应原进行初步分离纯化,免疫印迹进行检测。结果sds-page显示椰子花粉粗提液有10条蛋白带,其中相对分子质量(mr)为60 000、50 000、35 000、28 000、19 000、16 000和14 000的蛋白可与椰子花粉过敏性病人血清ige结合,且mr50 000、16 000和14 000为主要变应原;离子交换层析结果显示主要过敏原成分主要分布在ⅴ峰中。结论对椰子花粉变应原进行了初步的分离、鉴定和纯化,为临床椰子花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。
不同尘螨过敏原诱导组胺释放能力分析
作者: 刘婉莹, 向军俭, 刘志刚 主题: 重组尘螨Derf1, Derf2, 肥大细胞, 组胺 年份: 2009
摘要: 目的:研究用肥大细胞组胺体外定向释放模型分析重组尘螨过敏原derf1和derf2的致敏差异性。方法:用重组尘螨致敏原derf1、derf2免疫c57/bl6小鼠,收集小鼠腹腔致敏肥大细胞(pmc),在96酶标板孔中分别按不同比例混合尘螨致敏组分诱导pmc定向释放组胺,荧光法检测其释放水平。结果:derf1、derf2及两者的混合物都能引起pmc释放组胺,其致敏效果derf2明显高于derf1,derf1、derf2混合致敏组胺释放量未见高于单组分致敏者。牛奶和虾的粗提液与空白对照不能引起pmc组胺的明显释放。结论:尘螨混合组分未能引起比单独derf1或derf2强的组胺释放,两者间不存在协同效应。组胺释放量随derf2比例升高而升高,推测在尘螨过敏中derf2起主要作用。尘螨与牛奶、虾之间不存在交叉反应。
在基础实验课中开设研究型实验的教学实践
作者: 汪安泰, 刘志刚, 张宇 主题: 实验教学, 组织学, 研究型实验 年份: 2007
摘要: 在传统的“组织学实验”课程中,利用现代实验教学手段压缩验证性实验课时,增开了40%的研究型实验。使以观察组织切片为主的验证性实验,变为深受学生喜爱的创新性课程。使学生的学习兴趣以及动手、创新能力和综合素质均获得明显提高。
花生Ara h6基因的克隆、表达以及免疫活性鉴定
作者: 闫浩, 刘志刚, 李荔, 陈家杰, 刘小平, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Arah6, 基因克隆表达, 免疫活性 年份: 2010
摘要: 目的:克隆花生主要过敏原arah6基因,诱导表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生arah6的基因,将测序正确的片段连入原核表达载体pet-28a上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中,iptg诱导表达,通过ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白,western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明花生arah6目的片段全长为438bp,编码145个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同。该基因诱导表达的产物纯化后经sds-page鉴定为17kda。western-blotting结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中ige结合,具有免疫原性。结论:成功克隆花生过敏原arah6的基因,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。
口虾蛄主要过敏原TM的单抗制备和免疫学特性鉴定
作者: 陈贺, 匡渤海, 刘志刚, 黄钟, 吴序栎, 胡川, 邹菊 主题: 口虾蛄, TM变应原, 单克隆抗体 年份: 2010
摘要: 目的制备和鉴定鼠抗虾主要变应原tm的单克隆抗体(monoclonal antibody,mcab)。方法用重组tm蛋白为免疫原,免疫balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤ns-1细胞融合。间接elisa法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白a亲和层析法纯化抗体。采用ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的ig亚型;通过间接elisa、western blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性,对常见食物的检测。结果获得4株可稳定分泌鼠抗虾主要变应原tm的单克隆抗体,其ig亚型均为igg1。且4株单抗均具有良好的效价。elisa和western blotting分析表明该4株单抗均能识别重组tm蛋白和天然的虾提取物。结论成功制备了4株鼠抗虾主要变应原tm的单克隆抗体,为建立tm检测及纯化方法奠定了基础。
豚草花粉过敏原的分析、鉴定与纯化
作者: 谢水祥, 朱清仙, 邬玉兰, 刘志刚, 韩立民 主题: 豚草花粉, 变应原, 分析 年份: 2010
摘要: 目的对豚草花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。方法提取豚草花粉粗提液,sds-page分离其蛋白组分并测定分子量,western-blotting鉴定其变应原组分,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果豚草花粉有30条蛋白带,其中主要条带有9条,70kda、40kda为其特异性变应原。经离子交换层析纯化出豚草花粉相对分子量为40kda的变应原主要分布在ⅰ峰。结论豚草花粉粗提液中主要变应原为70kda、40kda蛋白组分。
笔架茶色素的提取、鉴定及稳定性研究
作者: 王晓娟, 吴海强, 李静, 刘志刚 主题: 笔架茶, 色素, 提取, 稳定性试验, 鉴定 年份: 2010
摘要: 提取笔架茶色素并对其进行鉴定和稳定性分析。以清远笔架茶为原料,用加热和有机溶剂萃取法制取茶色素,分析提取时间(a)、料液比(b)对笔架茶色素提取率(α)的影响,采用三氯化铁试剂等方法对其进行鉴定,并分析酸碱、光和加热等外界因素对笔架茶色素稳定性的影响。a和b对笔架茶色素提取率的影响各不相同,优化提取条件为a1∶30,b30min,α为4.966%,鉴定结果表明笔架茶色素主要成分为多酚类衍生物和黄酮类化合物,该类茶色素在酸性条件下对光和热的稳定性较高。笔架茶色素主要成分为茶黄素和茶红素,在酸性条件下稳定性较高,为笔架茶资源的进一步研究及开发提供理论支持。
花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定
作者: 易海涛, 刘志刚, 闫浩, 刘芳, 赵郭存, 夏立新 主题: 花生, 过敏原, Arah2.02, 克隆, 表达, 免疫印迹 年份: 2010
摘要: 通过提取花生总rna,设计特异性引物,rt-pcr克隆花生ara h2.02基因,将反转录的基因连入pmd19-t simple vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pet-32a(+)上,并转入bl21(de3)宿主表达菌中,iptg诱导表达、western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与genbank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经sds-page鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的ige结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.
鸡蛋过敏原分离、鉴定与纯化
作者: 吴序栎, 杨志华, 刘志刚, 吉坤美 主题: 鸡蛋, 过敏原, 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE), 免疫印迹(Western-blotting), 离子交换层析 年份: 2009
摘要: 目的对鸡蛋中主要过敏原进行分离、鉴定与纯化。方法分别提取鸡蛋的蛋清与蛋黄的蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离鸡蛋的蛋白质组份,采用免疫印迹(western-blotting,wb)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对鸡蛋主要过敏原进行初步纯化。结果wb检测显示,蛋黄与鸡蛋过敏患者的阳性混合血清没有反应;蛋清中有4条蛋白带起反应,分子量分别为83,71,38,13 kd,尤以13 kd的蛋白质最为明显,离子交换层析可初步纯化出13 kd的过敏原蛋白。结论鸡蛋的主要过敏原为13 kd的蛋白质,为临床诊断和治疗鸡蛋过敏性疾病提供标准化的过敏原提供了基础依据。

 

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